resumen
El ejercicio físico acelera la movilización de ácidos grasos libres de los adipocitos blancos para proporcionar combustible para la energía. Esto sucede en varios tejidos y ayuda a regular un estado de metabolismo de todo el cuerpo. Bajo estas Condiciones, se sabe que la hidrólisis del triacilglicerol (TG) que se encuentra en los adipocitos blancos se incrementa a través de la activación de estos eventos lipolíticos, que se conoce como la «cascada lipolítica.,»De hecho, la evidencia ha demostrado que las respuestas lipolíticas en los adipocitos blancos se regulan al alza mediante el entrenamiento continuo de ejercicio (te) a través de los cambios adaptativos en las moléculas que constituyen la cascada lipolítica. Durante las últimas décadas, se han identificado muchas moléculas relacionadas con la lipólisis. Cabe destacar que el descubrimiento de una nueva lipasa, conocida como triglicérido lipasa adiposa, ha redefinido los conceptos existentes de la hidrólisis dependiente de la lipasa sensible a las hormonas de TG en adipocitos blancos., Esta revisión describe las alteraciones en las moléculas lipolíticas de los adipocitos blancos que resultan de la te, que incluye la regulación molecular de las lipasas TG a través de la cascada lipolítica.
1. Introducción
La obesidad, que es el resultado de una ingesta de energía superior al gasto energético, es un importante problema de salud mundial no solo en los países desarrollados (mundo occidental), sino también en los países de ingresos bajos y medios (países menos desarrollados) ., Los adipocitos blancos son capaces de almacenar el exceso de energía como triacilglicerol (TG), y juegan un papel clave en el metabolismo energético al proporcionar ácidos grasos libres (FFA) y glicerol a través de la hidrólisis de TG. La inducción de la lipólisis, así como la inhibición de la síntesis de TG en adipocitos blancos, se ha considerado un objetivo de la terapia para la prevención y mejora de la obesidad y sus trastornos relacionados., Por lo tanto, clarificar los mecanismos subyacentes a la alteración inducida por el ejercicio físico de las moléculas lipolíticas en adipocitos blancos sería útil para establecer un nuevo método para la terapia del ejercicio, así como para comprender los significados biológicos de los eventos lipolíticos en sí.
esta elucidación de la lipólisis ha demostrado cómo la acumulación ectópica de lípidos en el músculo esquelético y el hígado está estrechamente asociada con el síndrome de resistencia a la insulina y la diabetes ., En particular, se sabe que el flujo de ácidos grasos musculares juega un papel fundamental en el desarrollo de las anomalías del metabolismo energético muscular y de todo el cuerpo , lo que demuestra que un aumento en el consumo de lípidos intramusculares a través de la β-oxidación mitocondrial sería beneficioso para la prevención de trastornos relacionados con la obesidad. De hecho, en estudios anteriores, se ha demostrado que la ET aumenta la utilización metabólica de los lípidos en humanos sanos y obesos y reduce el almacenamiento de lípidos en el hígado ., Además, parece que la pérdida inducida por TE del contenido absoluto de lípidos en adipocitos blancos per se tiene un efecto positivo en la reducción de los niveles de redistribución de lípidos en otros tejidos a través de una atenuación del contenido de sustrato sintético, es decir, FFA y glicerol. Por lo tanto, la ET sería una herramienta altamente efectiva para reducir la acumulación de grasa ectópica y/o aumentar la hidrólisis de TG en los propios adipocitos blancos.,
se sabe que los mecanismos moleculares subyacentes a la lipólisis en los adipocitos blancos están regulados principalmente por la activación jerárquica de la cascada lipolítica, que se modifica a través de un sistema de producción de α – y β-AR-cAMP, ejerciendo así distalmente un cambio a la acción hidrolítica de las lipasas. La estimulación de estos dos ARs induce efectos opuestos: α-antilipolítico y β-lipolítico (los detalles se describen en la siguiente sección)., Cabe destacar que se ha demostrado que la activación completa de la lipólisis en adipocitos blancos solo se obtiene cuando las catecolaminas estaban en presencia de un antagonista an-AR en humanos, aunque no se observan cambios en roedores . Este componente antilipolítico que contrarresta la lipólisis mediada por β-AR ha sido bien conocido como el» equilibrio / β-adrenérgico». Por otro lado, Arner y sus colegas han demostrado que los-ARs modulan la lipólisis en reposo, mientras que los β-ARs modulan la lipólisis durante el ejercicio físico, incluso si existe un equilibrio /β-adrenérgico en los adipocitos blancos humanos., Además, se ha demostrado que el número de-ARs En jerboa, lirón y rata es menor que en los seres humanos, lo que sugiere que la lipólisis inducida por catecolaminas en roedores, que tienen un bajo número de-ARs, se regula a través de la alteración en la función β-lipolítica. Por lo tanto, los experimentos con jerboa, lirón y rata serían útiles para elucidar los cambios moleculares inducidos por el ejercicio físico en moléculas lipolíticas en adipocitos blancos humanos, porque los ARs modulan la respuesta lipolítica durante el ejercicio físico en humanos ., Se ha aceptado ampliamente que el ET facilita la lipólisis estimulada por hormonas en adipocitos blancos en mamíferos . Sin embargo, los efectos de la ET en el comportamiento molecular y en los niveles de expresión de las moléculas lipolíticas en los adipocitos blancos siguen siendo piezas faltantes del rompecabezas , aunque la evidencia reciente ha identificado tanto nuevos cofactores lipasa y lipolítica: lipasa de triglicérido adiposo (ATGL), proteínas de la familia PAT , identificación genética comparativa-58 (CGI-58), y lipotransina .,
el propósito de esta revisión es plantear el hecho de que el entrenamiento físico (te) indujo cambios en las moléculas lipolíticas a través de β-AR, comúnmente expresados en adipocitos blancos de humanos y roedores. Los resultados presentados de esta revisión se mezclan con los obtenidos en humanos y animales de experimentación. Sin embargo, la consideración de este punto de vista parece permitir una profundización de la comprensión de los eventos lipolíticos en las células grasas blancas por la ET, porque los cambios adaptativos inducidos por la ET de las moléculas lipolíticas en los adipocitos blancos son un mecanismo universal en las especies de mamíferos., Juntos, primero, se describen el mecanismo(s) actualmente conocido (s) de la cascada lipolítica y el comportamiento molecular de las lipasas y cofactores. A continuación, la atención se centra en los cambios adaptativos inducidos por la ET de las moléculas lipolíticas, que se obtuvieron principalmente de nuestros estudios de adipocitos blancos.
2. Estructura básica de la cascada lipolítica en adipocitos blancos
la lipólisis en adipocitos blancos está regulada por un fenómeno multifacético que está sujeto principalmente a distintos controles temporales, como la estimulación hormonal a través de catecolaminas., La activación hormonal de la lipólisis en los adipocitos está mediada por un proceso tradicional de transducción de señales dependiente de cAMP (Figura 1 (a)). La estimulación de los receptores acoplados a la proteína G (GPCR), es decir, -, – y-receptores adrenérgicos (β-ARs), induce un cambio conformacional en la subunidad Ga de la proteína G heterotrimérica (Gaßy) que conduce a la liberación de GDP y la unión a GTP. El Gas activado conduce a la activación de la adenilil ciclasa (AC) y a la producción de cAMP., Sin embargo, la estimulación de los GPCR, es decir , el receptor adrenérgico , el receptor de adenosina y el receptor de prostaglandina E2 , que estimulan la Gai, causa la inactivación de la CA y reduce la producción de cAMP, lo que resulta en una atenuación de la respuesta lipolítica. Además, la insulina atenúa la producción intracelular de cAMP a través de aumentos en la actividad de la fosfodiesterasa-3b (PDE-3B), que cambia cAMP A AMP a través de la activación de la proteína quinasa B/AKT (Figura 1(b))., Un aumento del nivel intracelular de cAMP fosforila y activa la proteína quinasa dependiente de cAMP A (PKA) y posteriormente fosforila la lipasa sensible a hormonas (HSL); es bien sabido que la fosforilación de HSL en Ser563, Ser659 y Ser660, por la proteína quinasa dependiente de cAMP (PKA), aumenta su actividad enzimática y que la cinasa regulada extracelular (ERK) induce la fosforilación de HSL en Ser600 en adipocitos 3T3-L1, aunque no hay estudios que apoyen este resultado en los adipocitos blancos de mamíferos primarios., HSL fosforilado activa la hidrólisis de TG en adipocitos a través de la translocación de HSL desde el citoplasma a la superficie de las gotitas de lípidos . Por otro lado , se ha reportado un efecto inhibitorio de la insulina sobre la actividad de HSL, y la proteína quinasa activada por AMP (AMPK) atenúa la actividad de HSL a través de un aumento en su fosforilación en Ser565 .,
(a)
(b)
(a)
(b)
en 2004, tres grupos publicaron de forma independiente el descubrimiento de una enzima que podría hidrolizar TG y la denominaron triglicérido lipasa adiposa (ATGL). A diferencia de HSL, ATGL no tiene especificidad para la hidrólisis de MG, ésteres de colesterol o ésteres de retinilo., ATGL , sin embargo, tiene una especificidad de sustrato para TG que es 10 veces mayor que la de DG, lo que indica que actúa selectivamente como el primer paso en la hidrólisis de TG y que su función hidrolítica no se limita al catabolismo de las gotas de lípidos en el tejido adiposo. Además, dos sitios de fosforilación de ATGL, en Ser404 y Ser428, han sido identificados en la región C-terminal en humanos . En contraste con la HSL, sin embargo, las funciones funcionales de la fosforilación enzimática, ya que involucra proteínas quinasas, permanecen desconocidas., Juntos, tanto HSL como ATGL actúan jerárquicamente para regular la hidrólisis de TG: ATGL inicia la lipólisis eliminando el primer FA de TG para, a su vez, producir DG; HSL genera un FA adicional de DG y MG para producir glicerol (Figura 2). En estos eventos, la fosforilación de las lipasas juega un papel central en la regulación de la actividad enzimática y está estrechamente asociada con el catabolismo de los adipocitos.
3. Regulación de la lipólisis a través de la acción coordinada de lipasas y cofactores
El descubrimiento de perilipina 1 proporcionó pruebas de cofactores que existen en el citoplasma y en la superficie de las gotas lipídicas ., Perilipin 1 es el miembro fundador de la perilipin, adipophilin, y TIP47 familia (conocida como la Pat / perilipin proteína de la familia) de proteínas recubiertas de gotas de lípidos y se expresa principalmente en el tejido adiposo blanco, donde cubre las gotas de lípidos, y en el tejido esteroidogénico . La perilipina 1 tiene hasta seis sitios de fosforilación (Ser81, Ser222, Ser276, Ser433, Ser492 y Ser517) en adipocitos por PKA ., Varios estudios han reportado que la perilipina 1 es multifuncional y es capaz de reducir la lipólisis basal a través de la combinación de HSL con gotas lipídicas para formar una barrera y promueve el movimiento de lipólisis de la perilipina 1 lejos de las gotas de grasa a través de mecanismos dependientes e independientes de la lipasa . Por otra parte, el CGI-58, también conocido como α/β hidrolasa dominio-que contiene la proteína 5 (ABHD5), se encontró para aumentar la actividad de TG hidrolasa de ATGL debido a una interacción directa con las proteínas ATGL ., CGI-58 también tiene la capacidad de ser asociado con la perilipina 1 , demostrando que las localizaciones de la perilipina 1 y CGI-58 están centralmente involucradas en la organización y regulación de las interacciones efectoras lipolíticas tanto en los Estados basales como estimulados por hormonas. El esquema de consenso conceptual se describe a continuación (figura 3). Bajo condiciones basales, CGI-58 se localiza en las superficies de las gotas lipídicas con perilipina 1, aunque ATGL existe predominantemente dentro del citoplasma , lo que resulta en una atenuación de la interacción de ATGL con CGI-58 ., La HSL también se encuentra completamente en el citoplasma, donde no se fosforila y se elimina de las gotitas lipídicas, reduciendo así la actividad de hidrólisis de la TG en los adipocitos . En contraste, la activación hormonal de β-ARs-PKA provoca la Asociación de CGI – 58 con ATGL en gotitas lipídicas fragmentadas siguiendo la rápida, en cuestión de minutos, disociación de pKa-fosforilada perilipina 1 en Ser517 y CGI-58 ., Durante ese tiempo, la PKA promueve tanto la fosforilación como la translocación de HSL fosforilado en Ser659 y Ser660 desde el citoplasma a gotas lipídicas , y, a su vez, la perilipina 1 actúa como una proteína de andamio para unirse a HSL con gotas lipídicas , lo que resulta en una inducción de la respuesta lipolítica máxima. Por lo tanto, los eventos de modificación en serie de moléculas lipolíticas, que apoyan la localización de lipasas, jugarían un papel crítico en la alteración adaptativa de la respuesta lipolítica en adipocitos blancos por Ejercicio físico.,
(a) Basal and inactivated conditions
(b) Hormone-activated conditions
(a) Basal and inactivated conditions
(b) Hormone-activated conditions
4. Efecto de la ET sobre el número de β-ARs, que es el primer paso en la movilización de la cascada lipolítica
como se mencionó en las secciones anteriores, la estimulación del sistema β-ARs-AC en adipocitos blancos resulta en un cambio en la producción de cAMP intracelular y en la activación posterior de la PKA., Por lo tanto, se espera que un aumento en el número de β-ARs, que se expresan en las superficies celulares, juegue un papel clave en la regulación ascendente de la lipólisis que es causada por la ET. En ET , sin embargo, hay una pequeña cantidad de evidencia que indica que no hay cambio en el número de β-ARs, que se miden por ligandos hidrofóbicos, en comparación con los adipocitos primarios de ratas control sedentarias., Por otra parte , la investigación utilizando ligandos hidrofílicos ha demostrado que el nivel de β-ARs En las superficies celulares se reduce significativamente debido a la ET en la rata, lo que indica que el nivel de β-ARs POR LA ET, al menos en parte, podría ser internalizado en el citoplasma en lugar de ser aumentado en las superficies celulares. Además, en la rata, se ha demostrado que la mejora del acoplamiento β-ARs-AC se observa en los adipocitos blancos de ET ., Estos resultados indican que un aumento inducido por ET en la lipólisis no depende del número de β-ARs, sino más bien de la mejora de la eficiencia de asociación de las proteínas β-ARs y Gs. Por lo tanto, una mejora inducida por ET de la lipólisis podría estar mediada por una alteración adaptativa en el post β-ARs.
bajo ET, la exposición repetida de altos niveles de catecolaminas plasmáticas durante episodios de ejercicio diario podría desencadenar la regulación descendente y cambiar la localización de β-ARs En el citoplasma en adipocitos blancos., Algunos estudios muy elegantes realizados por Shenoy y compañeros de trabajo han demostrado que los-ARs tienen un ciclo de rotación funcional desde la superficie celular hasta el citosol a través de la ubiquitinación de una manera dependiente de la dosis de catecolamina. Cabe señalar que el cambio adaptativo de los adipocitos en respuesta a la ET parece ser el resultado del efecto integrador de los episodios de ejercicio agudo. Por lo tanto, una comprensión de los eventos de tráfico agudo inducido por el ejercicio de-AR apoyaría la aclaración de la moderación adaptativa de β-ARs POR te., En los adipocitos epididimales primarios de rata, nuestros resultados obtenidos del ejercicio agudo demostraron que la localización de-ARs En la superficie celular se reguló al alza al menos 3 horas después del ejercicio con una interacción reducida de β-arrestina 2 y-AR, mientras que volvió a los niveles de control sedentario 24 horas después del ejercicio (Figura 4). La pérdida de la combinación de β-arrestina 2 y-AR resultó en una reducción de la ubiquitinación de-AR, lo que atenuó la internalización de-ARs En el citoplasma. Sin embargo, los ARS internalizados eran capaces de reciclarse rápidamente en la superficie de la célula ., En conjunto, el recambio de-ARs que fue inducido por cada sesión de ejercicio podría haber sido el resultado de la reducción de los niveles de-ARs En las superficies celulares por PE, porque, en este caso, no hubo cambios en la cantidad total de β-AR (Figura 4).
5. Alteración adaptativa en las proteínas G por Ejercicio físico Habitual
se sabe que tanto la subunidad α De La proteína Gs (Gsa) como la subunidad α de la proteína Gi (Gia), que se disocian de las subunidades β y γ por estimulación de α y β – ARs, desempeñan un papel clave en la acción sinérgica de la CA en los adipocitos blancos., Los ET supuestamente provocaron un aumento significativo en la actividad AC de los adipocitos blancos de rata , acompañado por una disminución en los niveles de proteína Gia, pero no causaron ningún cambio en los niveles de proteínas Gsa en los adipocitos blancos de rata . Además, la ET disminuyó significativamente los niveles de proteína Gia2, que inhibe predominantemente la actividad de CA, en adipocitos blancos de rata y en islotes pancreáticos de rata . Estos resultados indican que la ET regula positivamente los sistemas de transducción de señales a través de la inhibición de la función Gia en las células adiposas, lo que conduce a la activación de la CA., Sin embargo, el mecanismo(s) por el cual la ET induce la regulación a la baja de la proteína Gia2 es Desconocido. En nuestro estudio anterior, el ejercicio agudo redujo transitoriamente los niveles de proteínas Gia2 al menos 3 horas después del ejercicio a través de la maquinaria de degradación ubiquitina-proteasómica en adipocitos blancos de rata (Figura 5), lo que sugiere la posibilidad de que la regulación a la baja de la proteína Gia2 por la TE también pueda estar asociada con la acción de proteólisis inducida por el ejercicio agudo, porque la te a menudo se define por una repetición de episodios de ejercicio agudo., De hecho, se sabe que la promoción del sistema ubiquitina-proteasoma depende del ATP intracelular, que se produce en varias células durante el ejercicio . Además, los niveles de MuRF-1, una ligasa E3 específica para el músculo, se reducen por la PE en pacientes con insuficiencia cardíaca crónica . Así, en la ET, el efecto visible del ejercicio sobre la producción de energía celular y los sistemas transcripcionales selectivos podría ser uno de los desencadenantes de la regulación a la baja de las proteínas Gia2 en los adipocitos blancos (Figura 5). Sin embargo, esa conclusión requiere un estudio más detenido.,
6., Manipulación de moléculas lipolíticas mediante Ejercicio físico para suministrar energía
en los últimos años ha evolucionado el conocimiento de los mecanismos reguladores subyacentes a la lipólisis basal y estimulada por hormonas en los adipocitos. Sin embargo, poco se sabe sobre el efecto de la ET en el comportamiento molecular de las proteínas lipolíticas, es decir, perilipina 1 y CGI-58, en adipocitos blancos., En ratas, los estudios de ET no han mostrado ningún cambio en la acumulación intracelular de cAMP en adipocitos blancos en comparación con un control sedentario , lo que sugiere la posibilidad de que el comportamiento molecular de las proteínas lipolíticas, que se producen en la célula, juega un papel clave en la mejora inducida por HE de la respuesta lipolítica., De hecho, nuestro estudio anterior indicó que los adipocitos blancos obtenidos de ratas ET mejoran los niveles de subunidades catalíticas de las proteínas PKA y la proteína de anclaje PKA 150 (AKAP150), que promueve la Unión de PKA y su sustrato, con la activación de PKA y HSL en la fracción de gotitas lipídicas de homogeneizado de adipocitos . Estos resultados explicarían el fenómeno por el cual el anclaje inducido por ET de AKAP150 a PKA aumenta la magnitud de la señalización de cAMP en adipocitos blancos, incluso si las acumulaciones de cAMP intracelular no aumentan como resultado de la ET., En ratas, los niveles de HSL en los adipocitos son regulados al alza por ET a pesar de la obesidad o circunstancias normales en un individuo , lo que sugiere que la acción de mejora mediada por AKAP150 De PKA provoca fácilmente la interacción de PKA con HSL, activando así la fosforilación de HSL en el espacio citoplasmático. Sin embargo, en los adipocitos blancos de rata, la fosforilación de HSL por ejercicio agudo se acompaña de un aumento en la producción intracelular de cAMP. Por lo tanto, la alteración funcional en AKAP150 podría desempeñar un papel crítico en el aumento adaptativo de las respuestas lipolíticas por ET en adipocitos blancos.,
Alsted y sus colegas fueron los primeros en informar que los niveles de proteína ATGL se incrementan significativamente en el músculo esquelético humano por PE, aunque el tejido adiposo se utiliza para identificar ATGL . Es de destacar que la deleción de ATGL en ratones perjudica el rendimiento del ejercicio y que los ratones ATGL knockout no muestran aumento en los niveles circulantes de FFA durante el ejercicio , sugiriendo que un cambio molecular en ATGL, así como en HSL, juega un papel en el suministro de FFA de adipocitos blancos durante el ejercicio físico como combustible para el metabolismo., Hasta la fecha, sin embargo, poco se sabe sobre el efecto de la ET en los cambios moleculares de ATGL en adipocitos blancos. Recientemente, en ratas, demostramos que el ARNm, los niveles de proteínas de ATGL y las proteínas HSL son regulados al alza por ET y que las actividades de unión al ADN del receptor activado por proliferación de peroxisoma-γ 2 (PPAR-γ2) están estrechamente asociadas con la regulación al alza inducida por ET de ATGL . Bajo estas condiciones, la Unión de CGI – 58 a ATGL se incrementó significativamente en las gotitas lipídicas con disociaciones de CGI-58 y perilipina 1., Estos resultados indican que la aceleración inducida por te de las respuestas lipolíticas está, al menos en parte, mediada por la hiperfunción de la proteína recién sintetizada a través de la activación transcripcional de ATGL. Mientras tanto, no hay evidencia en cuanto a si la fosforilación mediada por PKA de ATGL está involucrada en la hidrólisis de TG por ET, aunque al menos un estudio previo ha demostrado que el aumento de la fosforilación de ATGL en Ser406, un sitio de fosforilación mediada por PKA, durante el ayuno y los episodios individuales moderados de ejercicio se asocia con una tasa elevada de lipólisis en ratones ., En nuestro estudio piloto, El ET mostró niveles más altos de ATGL fosforilado en comparación con el control sedentario en adipocitos blancos epididimales de rata (datos no publicados). Estos resultados sugieren la posibilidad de que la ET podría causar un cambio conformacional provocado por la fosforilación en las estructuras proteicas de ATGL, lo que podría resultar en una hipercombinación de CGI-58 en gotitas lipídicas , mejorando así las respuestas lipolíticas en adipocitos blancos de rata., En conclusión, varios resultados han indicado que la localización y / o fosforilación de moléculas lipolíticas, como perilipina 1, CGI-58, HSL y ATGL, tiene una función central en la alteración adaptativa inducida por te de la lipólisis en adipocitos blancos y que la activación mediada por AKAP150 de la PKA también juega un papel clave en este mecanismo (Figura 6).
7., Conclusión
Está bien documentado que el ejercicio de intensidad moderada acelera las respuestas lipolíticas en adipocitos blancos humanos . En esta revisión, los estudios que muestran tanto el PE como el ejercicio agudo de intensidad ligera a moderada indicaron que la intensidad moderada del PE provoca claramente una mejora de la lipólisis en adipocitos blancos con una alteración orquestal en moléculas lipolíticas de manera positiva. Sin embargo, poco se sabe sobre el comportamiento inducido por el ejercicio de alta intensidad de moléculas lipolíticas en adipocitos blancos hasta ahora. Se necesitan más estudios para aclarar este punto.,
una aclaración de los cambios moleculares inducidos por HE en una cascada lipolítica se aplicaría no solo a la prevención de la obesidad sino también a la elucidación de una metodología para avances en la efectividad del ejercicio. Sin embargo, en los adipocitos Blancos no existe evidencia completa para explicar el mecanismo(s) subyacente (s) a los cambios adaptativos inducidos por HE en la lipólisis., En particular, no hay nuevos conocimientos sobre las alteraciones en los receptores acoplados a la proteína G, ni sobre la familia de las proteínas G y los eventos de modificación relacionados provocados por HE, aunque algunos resultados obtenidos en nuestros estudios han demostrado que el sistema ubiquitina-proteasoma juega un papel en la amplificación aguda mediada por el ejercicio de la cascada lipolítica a través de los niveles de expresión de las proteínas-AR y Gia2., Sin embargo , es de destacar que se han identificado más de 200 genes que regulan la morfología de las gotas lipídicas en Drosophila, lo que sugiere que nuevas moléculas, que son desconocidas en especies de mamíferos, estarían relacionadas con la regulación de eventos lipolíticos en adipocitos blancos con o sin ejercicio., En un futuro próximo, la búsqueda de nuevas moléculas con el objetivo de dilucidar sus funciones de manera específica para el ejercicio arrojará nueva luz sobre los cálculos de un sistema lipolítico de ejercicio altamente efectivo y mejorará la comprensión biológica de los adipocitos blancos como un «vehículo» para el almacenamiento y suministro de energía.,r>
Conflicto de Intereses
Los autores declaran que no existe conflicto de intereses.
reconocimiento
Este trabajo fue apoyado en parte por una subvención para investigación científica del Ministerio de Educación, Cultura, Deportes, Ciencia y Tecnología de Japón.