Sådan minder blande sig afhænger af, hvornår nye læring opstår
for At teste den hypotese, at timingen af den anden uddannelse er en afgørende faktor i vurderingen af, om proaktiv eller med tilbagevirkende kraft der opstår interferens, skal vi ansat et paradigme, der var designet til at undersøge konkurrence mellem to forskellige tidskoder, der er uddannet fra hinanden, men har et fælles resultat, e.,g., samme type konditioneret reaktion23. Specifikt, har vi udført en dobbelt appetitive klassisk konditionering procedure, der involverer to neutrale kemiske stimuli, gamma-nonalactone amyl eller acetat (den betingede stimuli), som begge er blevet parret med en iøjnefaldende mad stimulus (saccharose, den ubetinget stimulus), som aktiverer den veldefinerede fodring kredsløb af Lymnaea11,24,25., En enkelt parring af enten konditioneret stimulus med den ubetingede stimulus fører til dannelse af langvarig appetitiv hukommelse, især med ikke-bortfald og bortfaldsperioder observeret på samme tid punkter under hukommelseskonsolidering8, 19 (supplerende fig. 1). Fortløbende træning med disse to appetitive paradigmer blev anvendt til at fastslå den type interferens, der forekom under en ikke-bortfald versus en bortfaldsperiode af den samme konsolideringssekvens.,
Dyr, der blev trænet med gamma-nonalactone + saccharose (omtalt som “den første appetitive uddannelse”), og derefter en anden uddannelse af amyl acetat + saccharose (benævnt “anden appetitive uddannelse”) blev anvendt på en ikke-lapse (1 h) eller bortfalder (2 t) punkt af den første hukommelse. De blev derefter testet for tilstedeværelsen af langtidshukommelse 24 timer efter den første træning (fig. 1a)., Dyr, der modtog den anden appetitive træning på non-lapse-punktet, bevarede en hukommelse for den første konditionerede stimulus (gamma-nonalacton), men ikke for den anden konditionerede stimulus (amylacetat) (fig. 1b, ‘non-lapse’), hvilket indikerer proaktiv interferens, hvorimod dyr, der modtog den anden appetitive træning under lapse-punktet, havde en hukommelse for den anden konditionerede stimulus, men ikke den første konditionerede stimulus (fig. 1b, ‘lapse’), indikativ for tilbagevirkende interferens (gamma-nonalacton testede dyr: envejs ANOVA, p < 0.,001 (F(3,132) = 17.27), Bonferroni test: 1 h vs naïve p < 0.001, first training alone vs naïve p < 0.001, 2 h vs naïve p > 0.05. Amyl acetate tested animals: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(3,123) = 9.72), Bonferroni test: 2 h vs naïve p < 0.001, second training alone vs naïve p < 0.001, 1 h vs naïve p > 0.05).
Proaktiv og med tilbagevirkende kraft interferens og parallelle konsolidering af associative minder efter enkelt-forsøg med aircondition. en forenklet tidslinje med dobbelt appetitivt konditioneringsparadigme. b Dyr viste en større respons til det første betinget stimulus (CS), gamma-nonalactone (GNL), efter første træning alene (n = 40), eller når anden uddannelse fandt sted under ikke-lapse (1 h: n = 32), men ikke bortfalder (2 h: n = 29) i forhold til det naive kontrol (n = 35)., Respons på den anden konditionerede stimulus, amylacetat (AA), var større hos dyr, der modtog anden træning alene (N = 24) eller anden træning i løbet af bortfaldet (2 h: n = 31), men ikke non-lapse (1 h: N = 32) sammenlignet med naive kontroller (n = 40). Violin plots viser tæthed af data, der strækker sig fra minimum til maksimum værdier. Interne bo .plots viser median og interkvartil rækkevidde (første og tredje kvartil). Whishiskers repræsenterer minimum til maksimum værdier. Cirkler viser middelværdien. C forenklet tidslinje for appetitvækkende efterfulgt af aversiv træning., d Dyr viste en større respons til appetitive betinget stimulus (gamma-nonalactone) efter appetitive uddannelse alene (n = 30), eller når aversiv uddannelse fandt sted under ikke-lapse (1 h: n = 29), men ikke bortfalder (2 h: n = 30) sammenlignet med naive kontrol (n = 28). Responser på den aversive konditionerede stimulus, L-serin( L-S), var lavere hos dyr, der modtog aversiv træning under bortfaldet (2 h: n = 29), non-lapse (n = 30) og efter aversiv træning alene (N = 30) sammenlignet med naive kontroller (n = 29). e forenklet tidslinje af aversive efterfulgt af appetitiv træning., f Dyr, der viste lavere reaktion på aversiv med aircondition aversiv stimulus efter træning alene (n = 20), eller når appetitive uddannelse fandt sted under ikke-lapse (1 h: n = 20), men ikke bortfalder (2 h: n = 20) sammenlignet med naive kontrol (n = 20)., Svar til appetitive betinget stimulus var større i dyr, der har modtaget appetitive uddannelse i lapse (2 h: n = 20), ikke-lapse (n = 16), og efter appetitive uddannelse alene (n = 20) sammenlignet med naive kontrol (n = 20)
Det var muligt, at fraværet af hukommelsen, efter interferens, der skyldes, at dyret er i stand til samtidig at lagre to lignende langtidshukommelsen., For at undersøge dette trænede vi dyr med begge typer appetitive paradigmer, men adskilt 24 timer fra hinanden, hvilket gjorde det muligt for den første hukommelse at konsolidere sig fuldt ud inden den anden træning (supplerende Fig. 2a). Hvert dyr blev testet for dets respons på begge konditionerede stimuli 24 timer efter den anden træning. For at sikre, at rækkefølgen af test ikke påvirkede dyrets respons, blev en gruppe testet for deres respons på gamma-nonalacton først og derefter amylacetat 1 time senere, mens en anden gruppe modtog dem i omvendt rækkefølge., Begge grupper viste en større respons på begge konditionerede stimuli sammenlignet med naive dyr, der indikerer tilstedeværelsen af to minder i det samme dyr (supplerende fig. 2b).
en alternativ hypotese er, at manglende evne til at konsolidere begge minder samtidigt skyldes konkurrence mellem to lignende minder, der bruger det samme underliggende neurale kredsløb. Vi undersøgte, om de samme interferensregler blev anvendt, da den anden træning anvendte et paradigme, der bruger et andet kredsløb end det, der blev aktiveret ved den første læring., Aversiv konditionering af fodring på Lymnaea behandles af et neuronalt kredsløb, der ikke er involveret i fødevarebelønningsbetingelser26; derfor blev et aversivt paradigme brugt til at teste konkurrencehypotesen. En enkelt parring af L-serin (en appetitiv stimulus, se Fig. 1d) med kinin (en aversiv stimulus, der hæmmer feeding27) induceret lang sigt hukommelse, udtrykt som en nedsat fodring respons til den betingede stimulus, når testet på 24 timer sammenlignet med naive kontrol (naive fodring forskel score: 21.1 ± 2.5, n = 16, L-serin + kinin fodring forskel score: 9.8 ± 2.,1, n = 17, uparret t-test, p = 0.0016, t = 3.47, df = 31). Især under konsolideringen af den aversive hukommelse forekom der bortfald på samme tidspunkter som under appetitiv hukommelsesdannelse, hvilket viser, at bortfald er et generelt træk ved konsolideringen på Lymnaea (supplerende fig. 3). Dernæst blev dyr trænet med gamma-nonalacton + saccharose (appetitiv træning) efterfulgt af aversiv træning ved de samme ikke-lapse-eller lapse-punkter i den første hukommelse som i det dobbelte appetitive paradigme (fig. 1c)., Aversiv træning under non-lapse-punktet gav anledning til både en appetitiv og aversiv hukommelse (fig. 1d, ‘non-lapse’), hvilket indikerer fraværet af proaktiv interferens, hvorimod aversiv konditionering under det appetitive hukommelsesfald resulterede i en aversiv hukommelse, men ikke en appetitiv hukommelse (fig. 1d, ‘udløber’) (gamma-nonalactone testede dyr: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(3,113) = 9.47), Bonferroni test: 1 h vs naive p < 0.001, appetitive alene vs naive p < 0.001, 2 h vs naive p > 0.05., L-serin testede dyr: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(3,114) = 12.13), Bonferroni test: aversiv alene vs naive p < 0.001, 1 h vs naive p < 0.001, 2 h vs naive p < 0.01).
for at teste, om manglen på proaktiv interferens mellem den appetitive og den aversive hukommelse skyldtes, at sidstnævnte var stærkere end den førstnævnte og derfor mindre tilbøjelig til interferens, vendte vi om træningsrækkefølgen og udførte aversiv efterfulgt af appetitiv træning (fig. 1e)., Med denne omvendte paradigme, vi har observeret det samme mønster hukommelse interferens, som når appetitive uddannelse forud for aversiv uddannelse (L-serin testede dyr: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(3,76) = 7.34), Bonferroni test: 1 h vs naive p < 0.001, aversiv alene vs naive p < 0.01, 2 h vs naive p > 0.05. Gamma-nonalactone testede dyr: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(3,72) = 10.18), Bonferroni test: appetitive alene vs naive p < 0.,001, 1 h vs naive p < 0.01, 2 h vs naive p < 0.001) (Fig. 1f). Samlet set viser disse resultater, at induktionen af en ny associativ hukommelse under bortfaldet af den første hukommelse forårsager tilbagevirkende interferens, uanset om det andet træningsparadigme er appetitivt eller aversivt. I løbet af ikke-bortfaldsperioden forekommer proaktiv interferens dog kun, når det andet træningsparadigme ligner det første. Med et forskelligt paradigme forekommer konsolidering af dobbelt hukommelse., Vi forsøgte derefter at identificere mulige neurale mekanismer, der ligger til grund for disse forskelle i adfærdsmæssige udtryk for den ene eller den anden type hukommelse afhængigt af de anvendte paradigmer.
Sådan to hukommelser blande sig, afhænger af det kredsløb, de bruger
Vi antager, at den manglende evne til samtidig at konsolidere to appetitive minder skyldes både at blive kodet i den samme hukommelse kredsløb, der henviser til, at den aversiv foreningens brug af en forskellige kredsløb mekanisme tillader dobbelt konsolidering udenfor frister., En tidligere identificeret cellulær ændring involveret i langtidshukommelse efter appetitiv konditionering i Lymnaea er den vedvarende depolarisering af en modulatorisk neuron i fodringsnetværket, cgcs (cerebrale gigantiske celler)9,28,29. De læringsinducerede depolariseringsporte – i den konditionerede stimulusindgang til fodringskommandolignende interneuroner, som i uddannede dyr resulterer i aktivering af fodringsnetværket9. Her demonstrerer vi, at begge typer appetitiv træning inducerer den samme vedvarende depolarisering sammenlignet med naive kontroller (envejs ANOVA, p < 0.,001 (F(2,35) = 26.3), Bonferroni test: første træning alene vs naive p < 0.001, anden uddannelse alene vs naive p < 0.001, første træning alene vs anden uddannelse alene (p > 0.05) (Fig. 2a–c). Vi testede derefter, om aversiv konditionering påvirkede CGC ‘ erne og fandt ingen signifikant ændring i deres membranpotentiale sammenlignet med naive kontroller (uparret t-test, p = 0.53, t = 0.63, DF = 22) (fig. 2d-f)., Der var ingen ændring i CGC membran modstand eller spike egenskaber efter enten appetitive eller aversiv conditioning (CGC membran modstand: appetitive uddannelse, En-vejs ANOVA, p = 0.17 (F(2,34) = 1.77). Aversiv træning, uparret t-test, p = 0,67, t = 0,44, df = 22.) (Fig. 2c, f; supplerende Fig. 4a, B). Derfor inducerer begge appetitive paradigmer den samme cellulære ændring, mens aversiv træning ikke påvirker egenskaberne af denne neuron, hvilket antyder, at hukommelsen er kodet i et andet kredsløb.
Forskellige neurale substrater for appetitive versus aversiv læring. et repræsentativt spor af CGC-aktivitet 24 timer efter dyr modtog første eller anden appetitiv træning alene og fra naive dyr. b CGC ‘ er fra både første (n = 12) og anden (n = 13) appetitive træningsgrupper var depolarisering sammenlignet med naive kontroller (n = 13), men ikke sammenlignet med hinanden. Violin plots viser tæthed af data, der strækker sig fra minimum til maksimum værdier. Interne bo .plots viser median og interkvartil rækkevidde (første og tredje kvartil)., Whishiskers repræsenterer minimum til maksimum værdier. Cirkler viser middelværdien. C CGC-membranresistens var ikke forskellig mellem forholdene. D repræsentative spor af CGC-aktivitet fra aversivt konditionerede og naive dyr. e der var ingen signifikant forskel i membranpotentiale mellem de to betingelser (N = 12 for begge). f Membranresistens var ikke signifikant forskellig mellem forholdene. g Varmeplotter med normaliseret PlB-aktivitet som reaktion på aversiv konditioneret stimulus (CS) i præparater fra aversivt uddannede og naive dyr., Data organiseret fra høj til lav PlB-aktivitet efter den konditionerede stimulus. Hvid linje repræsenterer starten på konditioneret stimulus. h repræsentative spor og normaliseret linje plot af PlB spike frekvens som reaktion på den aversive konditioneret stimulus. Linje og skygge viser henholdsvis middelværdi error standardfejl for middelværdien. jeg opvarmer plots af normaliseret PlB-aktivitet som reaktion på appetitlig betinget stimulus i præparater fra appetitvækkende uddannede og naive dyr. J repræsentative spor og normaliseret linje plot af PlB spike frekvens som reaktion på den appetitive betinget stimulus., Forkortelser: appet, appetitive; avers, aversiv; tr, uddannelse; MP, membran potentiale; norm, normaliseret; forberedelse, forberedelse
næste gang Vi søgt at identificere ændringer induceret af aversiv aircondition. Da den konditionerede reaktion var en reduktion i fodring, vi begrundede, at det kunne skyldes en forbedret hæmmende effekt stammer fra defensiv-tilbagetrækning kredsløb., En kandidatneuron til dette er PlB interneuron30, der forbinder tilbagetræknings-og fodringskredsløbene, og dets aktivering ved aversiv stimuli er tilstrækkelig til at hæmme fodring31. I isolerede hjernepræparater fra aversivt konditionerede dyr forårsagede en in vitro-analog af den konditionerede stimulus (se metoder) en signifikant stigning i PLB-fyringshastighed sammenlignet med naive kontroller (Mann .hitney-test, p = 0, 029, U = 106) (fig. 2g, h) samt et lavere udtryk for fiktive fodringscyklusser (et in vitro-korrelat af det konditionerede respons) (supplerende Fig. 4c, d)., PlB fyring priser, før den betingede stimulus, var ikke signifikant forskellige mellem forhold (uparrede t-test, p = 0.94, t = 0.08, df = 36). CGC-respons på den konditionerede stimulus viste ingen ændring efter aversiv konditionering (supplerende fig. 4e). Vi har testet, om PlB aktivitet blev ændret efter appetitive, men fandt ingen ændring i PlB fyring priser i svar til appetitive betinget stimulus (Mann-Whitney test, p = 0.39, U = 56.5) eller i sin fyring priser, før den betingede stimulus (uparrede t-test, p = 0.38, t = 0.89, df = 22) (Fig. 2i, j)., Præparater afledt af appetitligt konditionerede dyr viste dog stadig et større fiktivt fodringsrespons på gamma-nonalacton sammenlignet med naive kontroller (supplerende fig. 4f, g). Disse resultater viser, at aversiv læring forårsager en stigning i en hæmmende vej, adskilt fra de neurale ændringer, der understøtter appetitive minder. Samlet set antyder disse resultater, at konkurrence inden for det samme hukommelseskredsløb er en begrænsende faktor i dyrenes evne til at konsolidere flere lignende minder., En sådan konkurrence påvirker ikke konsolideringen af forskellige minder, der er afhængige af forskellige kredsløbsmekanismer, og tegner sig for manglen på proaktiv indblanding af de appetitive og aversive minder på non-lapse-punktet.
tilbagevirkende interferens kræver ny læring generelt
Vi forsøgte derefter at dissekere, hvilket aspekt af den anden træning der var ansvarlig for tilbagevirkende interferens ved bortfaldspunkter., Vi har testet, om induktion af en anden associativ hukommelse var nødvendigt at blokere den første hukommelse, eller om blot præsentationen af den betingede og ubetingede stimuli under den anden træning var tilstrækkelig til at fungere som en hukommelse forstyrrende. For at teste dette udførte vi baglæns præsentation af den ubetingede stimulus + konditioneret stimulus (benævnt B.) (Fig. 3a), hvilket ikke resulterede i langtidshukommelsen ved hjælp af enten appetitive (Mann-Whitney test, p = 0.07, U = 172.5) eller aversiv protokoller (Mann-Whitney test, p = 0.67, U = 174.5) (Fig., 3b, C), der bekræfter, at B. – paradigmer ikke inducerer associativ hukommelse. Næste, vi er udført enten appetitive eller aversiv BW aircondition på et bortfalder punkt af den første hukommelse og fandt, at ingen af dem havde en effekt på forekomsten af de første hukommelse (appetitive BW: Kruskal–Wallis test, p = 0.0043, H = 10.88; Dunn ‘ s test, BW på 2 timer vs naive p < 0,05 og første træning alene vs naive p < 0.01. Aversiv BW: Kruskal–Wallis test, p = 0.001, H = 13.81; Dunn ‘ s test, BW på 2 timer vs naive p < 0.,05, første træning alene vs naive p < 0.001) (Fig. 3d-g). Disse resultater antyder, at induktion af en anden associativ hukommelse er nødvendig for tilbagevirkende interferens med den første hukommelse.
erhvervelsen af ny hukommelse er nødvendig for tilbagevirkende interferens. en tidslinje med baglæns konditionering (B.) paradigme., B B B-præsentation af saccharose og amylacetat (AA) fremkalder ikke en signifikant større respons på den konditionerede stimulus (CS) sammenlignet med naive kontroller, når de testes ved 24 timer (B.: n = 24, naive: n = 21). Violin plots viser tæthed af data, der strækker sig fra minimum til maksimum værdier. Interne bo .plots viser median og interkvartil rækkevidde (første og tredje kvartil). Whishiskers repræsenterer minimum til maksimum værdier. Cirkler viser middelværdien. C B.præsentation af kinin og L-serin (L-s) inducerer ikke en aversiv hukommelse (b.: n = 19, naive: n = 20)., d tidslinje af B.med saccharose og amylacetat under bortfaldet af den første appetitive hukommelse (gamma-nonalacton (GNL) parret med saccharose). e B.under bortfaldet påvirkede ikke langtidshukommelsen sammenlignet med naive kontroller (2 timer: n = 22, første træning alene: N = 21, naive: n = 24). f tidslinje af B with med kinin og L-serin under udløbet af den første appetitive hukommelse (gamma-nonalacton parret med saccharose)., g BW under bortfalder ikke påvirke den langsigtede hukommelse sammenlignet med naive kontrol (2 h: n = 20, første træning: n = 20, naiv: n = 20)
Dette rejste spørgsmålet om, hvorvidt det er specielt nye associativ læring eller nye læring i almindelighed, der kan forårsage interferens med tilbagevirkende kraft. For at løse dette brugte vi et ikke-associativt paradigme som den anden træning. Vi demonstrerede, at stærk taktil stimulation af hovedet fører til et sensibiliseret tilbagetrækningsrespons på en kort ‘light off’ stimulus (fig. 4a)., Denne korte stimulus udløser ikke en tilbagetrækning svar i naive dyr (Gentagen foranstaltninger, ANOVA, p = 0.62 (F(3,42) = 16.58)) (Fig. 4a). Derimod dyr, der blev udsat for stærke taktile stimulering 10 min før den ‘lys’ stimulus viste en betydelig tilbagetrækning svar (Gentagen foranstaltninger, ANOVA, p < 0.001 (F(3,42) = 0.54), dunnetts test: før vs 5 s, p < 0.001, før vs 10 e p < 0.001, før vs 20 s p > 0.05) (Fig. 4a)., Således forårsager stærk taktil stimulering af hovedet sensibilisering, en form for ikke-associativ læring.
ny ikke-associativ læring er tilstrækkelig til tilbagevirkende interferens. en taktil stimulering af hovedet inducerer kortvarig sensibilisering. 10 minutter efter taktil stimulering blev en kort lys-OFF stimulus præsenteret for dyret (indsat billede) og deres tilbagetrækningsrespons målt., Dyr viste en signifikant stigning i tilbagetrækningsresponsen på lys OFF stimulus, som varede i 10 s efter stimulus (venstre billede før stimulus; højre billede efter stimulus) (n = 15). Naive dyr viste ingen signifikant tilbagetrækningsrespons på den samme stimulus (n = 15). Data viser middelværdien ± standardfejl. B tidslinje for anvendelse af sensibiliserende stimulering efter appetitiv konditionering., C sensibilisering under bortfaldet, men ikke under ikke-bortfaldet, forstyrrer dyrets hukommelse for den konditionerede stimulus (CS), gamma-nonalacton (GNL), når den testes ved 24 timer (første træning alene: n = 29, 2 h: n = 19, 1 h: n = 22, naive: n = 29). Violin plots viser tæthed af data, der strækker sig fra minimum til maksimum værdier. Interne bo .plots viser median og interkvartil rækkevidde (første og tredje kvartil). Whishiskers repræsenterer minimum til maksimum værdier., Cirkler viser gennemsnittet
dernæst anvendte vi den sensibiliserende stimulering ved bortfaldspunktet for den appetitive hukommelse (fig. 4b). Vi viste, at det med tilbagevirkende kraft-blandede sig med den associative hukommelse, der henviser til, når de anvendes på den ikke-lapse punkt, hukommelsen var fejlfri (En-vejs ANOVA, p < 0.001 (F(3,78) = 7.191), Bonferroni test: første træning alene vs naive p < 0.001, 1 h vs naive p < 0.01, 2 h vs naive p > 0.05) (Fig. 4c)., Derfor forstyrrer erhvervelsen af enten en associativ eller ikke-associativ hukommelse i udløbsperioden med tilbagevirkende kraft den oprindelige associative hukommelse.
tilbagevirkende interferens forstyrrer hukommelseskonsolidering
Vi testede derefter, om den tilsyneladende udskiftning af den første hukommelse med den anden skyldtes tilbagevirkende interferens, der forstyrrer konsolideringen af den oprindelige hukommelse eller på grund af undertrykkelsen af dens udtryk af den anden hukommelse. Hvis den første hukommelse ikke kunne gendannes ved at blokere den anden, ville dette indikere, at dens konsolidering blev forstyrret., Hvis det imidlertid kunne gendannes, ville dette indikere, at udtrykket af det første hukommelsesspor aktivt undertrykkes af den eksisterende anden hukommelse. For at teste dette blev anden appetitiv træning udført 2 timer efter den første appetitive træning for at forstyrre den første hukommelse. Sensibiliserende stimulering blev derefter anvendt 2 timer senere, med bortfald i konsolideringen af den anden læring (fig. 5a) for at blokere den anden hukommelse (Fig. 5b)., Dette sikrede, at den sensibiliserende stimulering forekom ved et bortfaldspunkt i den anden hukommelse (2 timer), men et ikke-bortfaldspunkt i den første hukommelse (4 timer) (supplerende fig. 5a, B viser, at den sensibiliserende stimulering er tilstrækkelig til at blokere den anden appetitive hukommelse). Anvendelse af den sensibiliserende stimulering alene 4 timer efter den første appetitive træning har ingen effekt på den første hukommelse (supplerende fig. 5c, d). Selvom dette paradigme var vellykket ved at blokere den anden hukommelse, blev ekspression af den første hukommelse ikke gendannet ved 24 timer (fig. 5b, gamma-nonalacton)., Derimod, når der ikke er nogen sensibiliserende stimulation, der blev anvendt, var der forventet en afbrydelse af den første hukommelse og erhvervelse af den anden (amyl acetat testede dyr: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(2,73) = 21.11), Bonferroni test: ingen sensibilisering vs naive p < 0.001, ingen sensibilisering vs sensibilisering p < 0.001, sensibilisering vs naive p > 0.05. Gamma-nonalacton testede dyr: envejs ANOVA, p = 0,33 (f (2,64) = 1,12)) (fig. 5b).
blokering af den anden hukommelse fører ikke til gendannelse af den første hukommelse. en tidslinje af eksperiment. Dyrene modtog den første træning efterfulgt af den anden træning i løbet af 2 timer. Sensibiliserende stimulering blev anvendt 2 timer efter den anden træning (4 timer efter den første træning). Dyr blev derefter testet for deres respons på enten konditioneret stimulus (CS), gamma-nonalacton (GNL) eller amylacetat (AA) ved 24 timer., B-sensibilisering var tilstrækkelig til at blokere den anden hukommelse, mens ingen sensibiliserende stimuli resulterede i en stærk anden hukommelse sammenlignet med naive kontroller (sensibilisering: n = 22, Ingen sensibilisering efter anden træning: n = 24, naive: n = 30). Der var ingen øget respons på gamma-nonalacton ud over naive niveauer ved 24 timer på trods af blokeringen af den anden hukommelse., Dyr, der modtog den anden træning uden sensibilisering, havde heller ikke et signifikant andet respons på gamma-nonalacton sammenlignet med naive kontroller (sensibilisering: n = 22, Ingen sensibilisering efter anden træning: n = 18, naive: n = 27). Violin plots viser tæthed af data, der strækker sig fra minimum til maksimum værdier. Interne bo .plots viser median og interkvartil rækkevidde (første og tredje kvartil). Whishiskers repræsenterer minimum til maksimum værdier. Cirkler viser middelværdien. C tidslinje for injektion af anisomycin (ANI) efter den anden appetitive træning., d ANI blokerede konsolideringen af den anden hukommelse, mens saltinjektion resulterede i en stærk anden hukommelse (ANI: n = 20, saltvand: n = 20, naive: n = 22). ANI efter anden uddannelse ikke gendanne den første hukommelse, når testet på 24 timer (ANI: n = 20, saltvand: n = 20, naiv: n = 20)
brug af overfølsomhed protokol tilladt os at konkludere, at når den anden hukommelse blev blokeret på sin 2 h bortfalder punkt, den første hukommelse ikke dukke op igen., Men da den blokerer for den anden hukommelse med overfølsomhed kun kunne være klaret på den hukommelse, bortfalder 2 t, efter at den anden uddannelse, og vi vidste kun, at det slettes den anden hukommelse, når testet på de 24 timer, vi havde brug for en anden metode, der hurtigt blokke hukommelse dannelse og fører til sletning af den anden hukommelse på et tidligt tidspunkt. En sådan metode ville fastslå, om blokeringen af kun de tidligste processer i konsolideringen af den anden hukommelse ville redde den første hukommelse., Vi brugte derfor farmakologiske metoder til at blokere den tidlige konsolidering af den anden hukommelse. Behandling med translationel hæmmer anisomycin (ANI) hurtigt blokke syntese af nye proteiner i Lymnaea brain32 og dens post-training program forhindrer udtryk for hukommelse fra så tidligt som 1 h efter conditioning19 samt yderligere konsolidering i den langsigtede memory32. Dyr blev injiceret med ANI eller saltvand 10 minutter efter den anden appetitive træning (2 timer 10 minutter efter første appetitive træning) og testet for langtidshukommelse (fig. 5c)., ANI-injektion alene ved 2 timer 10 min havde ingen effekt på ekspressionen af den første hukommelse (supplerende fig. 5e, F), men det havde med succes blokeret den anden hukommelse (Fig. 5d). Denne tidlige indgriben kunne imidlertid ikke redde den første hukommelse (Fig. 5d), hvilket indikerer, at det faktisk blev forstyrret af den anden hukommelse inden for en time efter den anden træning. Saltvand, indsprøjtes dyr viste de forventede hukommelse forstyrrelser (amyl acetat testede dyr: One-way ANOVA, p < 0.001 (F(2,59) = 11.09), Bonferroni test: saltvand vs naive p < 0.,001, ANI vs saltvand p < 0.01, ANI vs naive p > 0.05. Gamma-nonalacton testede dyr: envejs ANOVA, p = 0,75 (f (2,57) = 0,295)) (fig. 5d). Disse eksperimenter antyder, at tilbagevirkende interferens sker inden for et tidligt tidsvindue efter erhvervelsen af den anden hukommelse. Vi konkluderer, at blokering af den anden hukommelse ikke fører til udtryk for et ‘undertrykt’ første hukommelsesspor. Disse eksperimenter understøtter derfor konklusionen om, at i det mindste på adfærdsniveau erstatter den anden hukommelse effektivt den første hukommelse.